pcr扩增原理动画（pcr扩增原理）

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1、PCR原理：DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。

2、双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。

3、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

4、PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。

5、重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。

6、每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

7、扩展资料：特异性强 PCR反应的特异性决定因素为：①引物与模板DNA特异正确的结合；②碱基配对原则；③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；④靶基因的特异性与保守性。

8、其中引物与模板的正确结合是关键。

9、引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。

10、聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。

11、再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。

12、灵敏度高 PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。

13、能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中最小检出率为3个细菌。

14、PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。

15、PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min是足够 的。

16、3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10Kb需延伸至15min。

17、延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。

18、对低浓度模板的扩增，延伸时间要稍长些。

19、循环次数 循环次数决定PCR扩增程度。

20、PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。

21、一般的循环次数选在30～40次之间，循环次数越多，非特异性产物的量亦随之增多。

22、参考资料：百度百科——PCR扩增。

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